La sélection commence par le colorant ou la sonde
La sélection d'un filtre de fluorescence commence par le colorant ou la sonde utilisés par votre test, et non par une longueur d'onde que vous n'avez pas confirmée. La liste documentée des colorants et sondes pour les filtres de fluorescence est FAM, SYBR Green, Green, HEX, TET, Cy3, JOE, ROX, Cy3.5, Texas Red, Cy5, LC Red640 et Cy5.5, avec d'autres dans la même liste documentée. Si votre test utilise un nom figurant sur cette liste, la sélection peut se poursuivre sur la base des exemples documentés d'excitation et d'émission. Si votre test utilise un nom absent de cette liste, la sélection ne peut pas se poursuivre par supposition : indiquez ce nom dans votre demande et demandez s'il est couvert.
Du colorant ou de la sonde à l'excitation et à l'émission
Chaque colorant ou sonde a un comportement d'excitation et un comportement d'émission. Les exemples documentés d'excitation et d'émission pour les filtres de fluorescence sont Ex 470-30 / Em 525-20, Ex 523-20 / Em 564-20, Ex 543-20 / Em 584-20, Ex 571-20 / Em 612-20 et Ex 628-35 / Em 692-45, avec un blocage croisé supérieur à 6. Ces exemples montrent la forme sous laquelle les valeurs d'excitation et d'émission sont données et permettent à un acheteur de comparer une exigence à un exemple documenté. Ils ne couvrent pas tous les colorants ou sondes et ne remplacent pas une confirmation dans la demande. L'étape de sélection est donc une étape de correspondance : faites correspondre votre colorant ou sonde à la liste documentée, faites correspondre votre exigence d'excitation et d'émission à un exemple documenté lorsqu'il en existe un, et demandez confirmation lorsqu'aucun exemple ne correspond.
Blocage, pente et composition du jeu
Après l'excitation et l'émission, les facteurs de sélection suivants sont le blocage et la pente. Le blocage est documenté comme une densité optique supérieure à 6 à 200 à 900 nm, ou à 200 à 1200 nm, avec un blocage croisé de densité optique supérieure à 6. La pente est documentée comme 50 pour cent à OD5 inférieure à 10 nm. Ces chiffres importent car les lectures de fluorescence mesurent une émission faible en présence d'une excitation forte : la lumière d'excitation parasite doit être tenue hors du trajet du détecteur, et la transition entre la région passante et la région bloquée doit être suffisamment raide pour les séparer. Les acheteurs qui ont besoin d'un chiffre de blocage ou de pente pour une autre plage de longueurs d'onde doivent indiquer cette plage dans la demande et demander confirmation. Enfin, déterminez si vous avez besoin de pièces individuelles ou d'un jeu de filtres cimenté. Plusieurs pièces peuvent être cimentées en un jeu de filtres de fluorescence, ce qui convient aux applications nécessitant que l'excitation, l'émission et les éléments associés fonctionnent comme un seul assemblage. Indiquez les éléments dont vous avez besoin et le colorant ou la sonde que chacun sert.
Sélection par application
L'application oriente la sélection de deux manières. Premièrement, la famille d'instruments compte : les systèmes d'analyse par détection par fluorescence biomédicale et les instruments de PCR quantitative en fluorescence en temps réel sont les familles d'applications documentées, et la famille PCR couvre la biologie moléculaire, le contrôle de la sécurité alimentaire et la surveillance des épidémies de santé publique. Deuxièmement, le test compte : le colorant ou la sonde que vous utilisez détermine quel exemple d'excitation et d'émission est pertinent. Le guide Fluorescence PCR couvre l'aspect applicatif, et la page filtres de fluorescence contient l'ensemble des preuves de spécification. La note sur la sélection des colorants détaille davantage la sélection par nom de colorant et de sonde.
Liste de contrôle de sélection
Veuillez confirmer les éléments suivants dans votre demande avant de commander : le nom du colorant ou de la sonde ; l'exigence d'excitation et d'émission ; la plage de blocage dont vous avez besoin ; la taille dont vous avez besoin parmi les tailles documentées ou la taille que vous exigez ; si vous avez besoin de pièces individuelles ou d'un jeu de filtres cimenté ; ainsi que la base de quantité et la base de livraison de votre commande.