La selección comienza por el colorante o la sonda
La selección de filtros de fluorescencia comienza por el colorante o la sonda que usa su ensayo, no por una longitud de onda que usted no ha confirmado. La lista documentada de colorantes y sondas para filtros de fluorescencia es FAM, SYBR Green, Green, HEX, TET, Cy3, JOE, ROX, Cy3.5, Texas Red, Cy5, LC Red640 y Cy5.5, con otros en la misma lista documentada. Si su ensayo usa un nombre de esa lista, la selección puede continuar con los ejemplos documentados de excitación y emisión. Si su ensayo usa un nombre fuera de esa lista, la selección no puede continuar por suposición: indique ese nombre en su consulta y pregunte si está cubierto.
Del colorante o la sonda a la excitación y la emisión
Cada colorante o sonda tiene un comportamiento de excitación y un comportamiento de emisión. Los ejemplos documentados de excitación y emisión para filtros de fluorescencia son Ex 470-30 / Em 525-20, Ex 523-20 / Em 564-20, Ex 543-20 / Em 584-20, Ex 571-20 / Em 612-20 y Ex 628-35 / Em 692-45, con bloqueo cruzado mayor que 6. Esos ejemplos muestran la forma en que se dan los valores de excitación y emisión, y permiten al comprador comparar un requisito con un ejemplo documentado. No cubren todos los colorantes o sondas, y no reemplazan una confirmación en la consulta. El paso de selección es, por lo tanto, un paso de coincidencia: haga coincidir su colorante o sonda con la lista documentada, haga coincidir su requisito de excitación y emisión con un ejemplo documentado cuando exista, y solicite confirmación cuando ningún ejemplo coincida.
Bloqueo, pendiente y composición del conjunto
Después de la excitación y la emisión, los siguientes factores de selección son el bloqueo y la pendiente. El bloqueo se documenta como densidad óptica mayor que 6 a 200 a 900 nm, o a 200 a 1200 nm, con bloqueo cruzado densidad óptica mayor que 6. La pendiente se documenta como 50 por ciento a OD5 menor que 10 nm. Esas cifras importan porque las lecturas de fluorescencia miden emisión débil frente a excitación fuerte: la luz de excitación dispersa debe mantenerse fuera de la trayectoria del detector, y la transición entre la región de transmisión y la región bloqueada debe ser lo suficientemente abrupta para mantenerlas separadas. Los compradores que necesiten una cifra de bloqueo o pendiente para un rango de longitud de onda diferente deben indicar ese rango en la consulta y solicitar confirmación. Por último, decida si necesita piezas individuales o un conjunto de filtros cementado. Varias piezas pueden cementarse en un conjunto de filtros de fluorescencia, lo que conviene a aplicaciones que necesitan excitación, emisión y elementos relacionados funcionando como un solo ensamblaje. Indique los elementos que necesita y el colorante o la sonda al que sirve cada uno.
Selección por aplicación
La aplicación orienta la selección de dos maneras. Primero, importa la familia de instrumentos: los sistemas de análisis de detección por fluorescencia biomédica y los instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real son las familias de aplicación documentadas, y la familia de PCR abarca biología molecular, pruebas de seguridad alimentaria y monitoreo de epidemias de salud pública. Segundo, importa el ensayo: el colorante o la sonda que usted usa decide qué ejemplo de excitación y emisión es relevante. La guía de fluorescencia PCR cubre el lado de la aplicación, y la página de filtros de fluorescencia contiene la evidencia completa de especificación. La nota de selección de colorantes explica con más detalle la selección por nombre de colorante y sonda.
Lista de verificación de selección
Confirme los siguientes puntos en su consulta antes de pedir: el nombre del colorante o la sonda; el requisito de excitación y emisión; el rango de bloqueo que necesita; el tamaño que necesita de los tamaños documentados o el tamaño que requiere; si necesita piezas individuales o un conjunto de filtros cementado; y la base de cantidad y la base de entrega para su pedido.